Analysis of Phosphoproteins Using a Benchtop MALDI-TOF Mass Spectrometer

Os espectrômetros de massa MALDI-TOF são um tipo de espectrômetro de massa usado em uma ampla gama de campos de forma semelhante ao LCMS, em termos de alto rendimento e alta sensibilidade. Estes instrumentos têm sido recentemente utilizados cada vez mais para medição simples de peso molecular e perfil de produtos sintetizados e compostos de alto peso molecular. Isso ocorre porque instrumentos desse tipo têm várias características vantajosas: íons com carga única são gerados para que os pesos moleculares possam ser facilmente reconhecidos, a faixa de massa é ampla e há muitas opções de solventes porque a amostra é seca antes da medição.
Por outro lado, devido às mudanças nas condições sociais nestes vários anos, os gabinetes governamentais, as universidades e as empresas privadas solicitam fortemente a redução dos custos tanto para a introdução como para o funcionamento dos instrumentos utilizados para tais aplicações. O espectrômetro de massa MALDI-TOF de bancada "MALDI-8020" é um novo instrumento que pode atender suficientemente a essas necessidades do mercado. O ponto digno de nota deste instrumento é que ele possui um tubo de vôo mais curto, característica principal de seu pequeno tamanho, mantendo um desempenho igual ou superior ao de um modelo convencional.
O desenvolvimento de instrumentos nos últimos anos está caminhando para especificações mais elevadas. No caso dos espectrômetros de massa MALDI-TOF, o modo reflectron tem atraído a atenção devido ao seu alto poder de resolução e função de análise de estrutura por MS/MS. A usabilidade do modo linear, por outro lado, é conhecida há muito tempo; no entanto, não houve grandes progressões técnicas no modo linear recentemente. O modo linear é, por exemplo, eficaz na detecção de fosforilação, que é uma modificação pós-tradução típica de proteínas, e na confirmação de pesos moleculares de compostos instáveis. Este artigo apresenta um exemplo de medição de digestões de fosfoproteína e análise de modificações de fosfato usando o espectrômetro de massa de bancada MALDI-TOF "MALDI-8020".

Usability of Linear Mode

O modo linear é eficaz na medição de compostos de alto peso molecular e compostos com grupos funcionais instáveis. Os compostos ionizados podem ser decaídos devido ao seu excesso de energia interna no espaço de voo livre pelo método MALDI. Como as velocidades dos íons fragmentados gerados neste processo são as mesmas do composto original, eles são reconhecidos como o mesmo peso molecular no modo linear. Por outro lado, no modo reflectron, tais fragmentos são separados de forma dependente da energia cinética em massas, que são observadas como massas individuais. Portanto, o poder de resolução de massa e a precisão podem ser obtidos no modo reflectron, mas também existem desvantagens: quando os grupos funcionais são dessorvidos dos componentes, os seus sinais podem tornar-se demasiado fortes ou, num caso extremo, os íons moleculares podem não ser detectados.

Como mostrado na Fig. 1, os peptídeos fosforilados podem fragmentar-se facilmente durante o voo. Para tais compostos, o modo linear é adequado para medição.

Fig.1 Ser Modificação de Fosfato e Perda Neutra

 

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